本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿及細胞上清液中的磷酸化核因子-κB（p-NF-κB）蛋白濃度。檢測范圍覆蓋0.313-20 ng/mL，靈敏度達0.16 ng/mL，適用于炎癥反應、免疫調控及腫瘤相關信號通路研究等領域。
產品名稱 |
小鼠磷酸化核因子-κBelisa試劑盒 | 英文名稱 | p-NF-κB ELISA Kit |
貨號 | CS-0904E | 規格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實驗 |
核心原理：
?固相化?：微孔板預先包被抗小鼠p-NF-κB抗體。
?結合?：加入標準品或樣本，p-NF-κB被固相抗體捕獲。
?檢測?：加入化的抗小鼠p-NF-κB抗體和HRP標記的親和素，形成"抗體-抗原-酶標抗體"復合物。
?顯色?：加入TMB底物，被HRP催化后由藍色變為黃色。
?測定?：用酶標儀在450nm波長測定吸光度(OD值)，濃度與OD值成正比。
樣本要求：
1. 樣本類型與處理
?血清?：使用無熱原/內毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復凍融。
?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。
?細胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。
?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。
2. 注意事項
樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。
細胞培養上清可能因細胞狀態等因素導致檢測波動，建議設復孔。
操作步驟：
試劑準備將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），濃縮洗滌液按 1:20 稀釋備用。標準品按說明書進行梯度稀釋，配制系列濃度標準曲線溶液。
實驗流程加樣：設置空白孔、標準孔、待測樣品孔，空白孔僅加稀釋液，其余孔分別加入標準品或待測樣品，37℃孵育。加酶標抗體：除空白孔外，每孔加入酶標抗體，輕輕混勻，37℃避光孵育。洗滌：棄去孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后甩干，重復洗滌 4-5 次，最后拍干殘留液體。顯色：每孔加入 TMB 顯色液，37℃避光孵育，孔內呈現藍色。終止：每孔加入終止液，混勻后顏色由藍色轉為黃色。檢測：在 450nm 波長下測定各孔 OD 值，15 分鐘內完成讀數。
關鍵提示實驗全程嚴格控溫，孵育時使用封板膜避免蒸發。洗滌需充分，否則易造成高背景、結果偏差。顯色液需避光，終止順序與加樣順序保持一致，確保充分混勻。
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